如何培養(yǎng)LLC1細胞(一)?
　　細胞培養(yǎng)是當前細胞生物學乃至整個生命科學研究與生物工程中基本的實驗技術(shù)。

　　動物細胞培養(yǎng)為疫苗生產(chǎn)、藥物研制與腫瘤防治等醫(yī)學實踐提供了全新的手段。細胞培養(yǎng)包括原核生物細胞，入細菌;真核單細胞生物，入酵母菌、四膜蟲等;植物細胞與動物細胞的培養(yǎng)以及于此密切相關(guān)的病毒的培養(yǎng)。

　　動物細胞培養(yǎng)

　　體外培養(yǎng)的細胞可分為原代細胞(LLC1細胞)與傳代細胞(LLC1細胞)。原代細胞是指機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)，適應(yīng)在體外培養(yǎng)下條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。

　　分散的細胞懸液在培養(yǎng)瓶中很快(在幾十分鐘至數(shù)小時內(nèi))就貼附在瓶壁上，這就稱為細胞貼壁。

　　分散呈圓球形的細胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展并開始有絲分裂，逐漸形成致密的細胞單層，稱為單層細胞(sigle layer cell),這種培養(yǎng)方法稱為單層細胞培養(yǎng)。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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