細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代,再培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法，同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程，懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

人外根鞘細(xì)胞建立和培養(yǎng)簡介:

創(chuàng)建的4因子轉(zhuǎn)錄法進(jìn)行細(xì)胞制作，原料為末梢血單核細(xì)胞，采樣簡單。如使用新鮮單核細(xì)胞，2周后可獲得細(xì)胞克隆體(圖1)，4周內(nèi)便可以制作出初代細(xì)胞(圖2)。在培養(yǎng)方面，使用無滋養(yǎng)層培養(yǎng)法對細(xì)胞進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可在每周獲得2-3倍的細(xì)胞(圖3，圖4)。在細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，進(jìn)行免疫染色測試，對細(xì)胞的未分化狀態(tài)進(jìn)行確定，分別對細(xì)胞進(jìn)行膜染色(圖5)及核染色(圖6)，由此得到高質(zhì)量的細(xì)胞。

人外根鞘細(xì)胞主要服務(wù):

1)細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層)

2)細(xì)胞增殖及冷凍保存

3)基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)

4)新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評估

人外根鞘細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?

原因:黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理;

2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢，且不影響細(xì)胞生長，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨人外根鞘細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競爭性生長，開始時對細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候，細(xì)胞生長就會受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進(jìn)行。以前(這個至少是10年以前)，很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時用國產(chǎn)血清，那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。

b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動。

c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)

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